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细胞生物学
细胞生物学
我司为广大客户提供基于细胞培养相关技术服务，为确保您的项目进展顺利，我们一律采用GIBCO品牌原装进口试剂(血清和培养基等)。服务项目包括细胞培养、细胞模型建立、细胞转染、稳定细胞系建立、细胞增殖/抑制、细胞周期、细胞凋亡检测等。
细胞转染，稳定细胞系建立及细胞模型
服务内容
一、细胞转染和稳定表达细胞株筛选
通过转染试剂或电穿孔方式等方式，将目的基因导入靶细胞24-48小时后，目的基因即在细胞内表达。此时为了建立稳定细胞系，可根据不同基因载体中所含的抗性标记，选用相应的药物对靶细胞进行筛选，从而得到稳定表达外源基因的细胞克隆。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。
二、针对不同种类细胞使用药物，低氧，压力等外源因素进行刺激等处理，建立相关的细胞模型，从而进行后续的研究工作。
服务特点
1、针对不同细胞系筛选合适的转染试剂和质粒浓度配比，提高转染效率和蛋白表达量
2、丰富的抗生素筛选经验和单细胞克隆鉴定方法提高实验效率
3、构建的稳定表达细胞株可稳定传代，极少发生性状丢失
收费标准
收费标准￥ | 项目周期（工作日） | |
质粒提取和蛋白表达检测 | ||
质粒小量提取 | 50/质粒 | 3 |
去内毒素质粒大提 | 600/质粒 | 3 |
单质粒细胞转染 | 1000/质粒 | 3 |
蛋白表达检测（WB） | 800/蛋白 | 5-10 |
荧光显微镜观察蛋白表达 | 600/蛋白 | 3 |
双质粒共转染 | 2500/对 | 5 |
多质粒共转染 | 请询价 | — |
基因表达敲低 | ||
siRNA的设计与合成 | 2000/基因 | 5-10 |
shRNA载体构建 | 5000/基因 | 15 |
去内毒素质粒大提 | 600/质粒 | 3 |
细胞转染 | 1000/基因 | 3 |
荧光定量PCR检测核酸水平敲低 | 600/基因 | 5 |
Western Blot检测蛋白表达 | 800/蛋白 | 5-10 |
基因稳定表达细胞株筛选 | ||
表达载体构建 | 请参见载体构建目录 | 15 |
去内毒素质粒大提 | 600/质粒 | 3 |
细胞转染，流式分选和抗生素筛选 | 20000/细胞系 | 40 |
Western Blot检测稳定细胞株蛋白表达 | 800/蛋白 | 5-10 |
基因稳定敲低细胞系筛选 | ||
siRNA的设计与合成 | 2000/基因 | 5-10 |
shRNA载体构建 | 5000/基因 | 15 |
去内毒素质粒大提 | 600/质粒 | 3 |
细胞转染，流式分选和抗生素筛选 | 25000/细胞系 | 40 |
Western Blot检测稳定细胞株蛋白表达 | 800/蛋白 | 5-10 |
病毒包装 | ||
包装质粒构建 | 2500/基因（<3000 bp） | 15 |
慢病毒包装系统 | 8000/107 | 15-20 |
腺病毒包装系统 | 8000/107 | 15-20 |
逆转录病毒包装系统 | 8000/107 | 15-20 |
蛋白表达检测（Western Blot 或ELISA） | 800/目的蛋白/膜；500/板 | 5-10 |
客户提供
1、待克隆基因和载体信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如无相关shRNA序列信息，本公司可代为设计并收取相关费用）；
2、待转染细胞株（如需使用常用肿瘤细胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）
公司交付
1、细胞转染效率评价结果（GFP荧光表达）
2、WB检测蛋白表达结果
3、敲低表达shRNA相关载体和菌液
4、稳定敲低细胞株或过表达细胞株
5、实验报告
细胞生物学特性和功能学检测
服务内容
一、细胞生长，增殖/抑制曲线
不同种类的细胞具有不同的生长速率，同一株细胞在不同的培养条件和处理下其生长速率也会发生很大改变。细胞的生长速率是反应细胞状态和外界刺激对细胞影响的一个重要指标。使用MTT和CCK-8方法对不同时间点和处理条件下活细胞进行检测，根据OD值判断细胞密度及生长速率。
二、克隆形成实验
与细胞生长曲线实验类似。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量，反应的是具有贴壁和有增殖活力的细胞数目。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。是检测细胞在正常和外界刺激条件下形成克隆的能力，间接反应细胞状态的好坏和外界处理的作用。
三、细胞迁移和侵袭实验
活体细胞通常都具有一定的迁移能力，不同细胞的迁移能力不同。与迁移相类似的能力是侵袭，具有裂解细胞基质的能力的细胞通常具有较强的侵袭能力。大部分肿瘤细胞的迁移能力较强，这也是反应肿瘤细胞体内发生转移的一个重要指标。研究中通常会先对细胞的迁移能力进行检测，再进一步观察该细胞是否具有侵袭能力。在进行迁移和侵袭实验过程中，我们会选择多种方法在不同的时间点进行检测。综合判断某种细胞的迁移和侵袭能力。
四、细胞周期和凋亡检测
细胞周期指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束为止的全过程，可分为间期与分裂期两个阶段。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。当细胞完成有限的分裂之后会逐渐衰老死亡，这一过程被称为凋亡。不同的蛋白或者药物等会对细胞周期产生一定的影响，进一步影响细胞增殖速率。凋亡作为一种细胞常见的死亡方式易受到外界环境和刺激的影响，随着细胞内Caspase的激活，凋亡通路发生活化，进一步诱导细胞凋亡的发生。目前有多种方法可以检测细胞凋亡，如Tunel，Annexin V+PI双染色等，也可以通过检测凋亡相关蛋白的表达反应细胞凋亡情况。
收费标准和服务周期
服务项目 | 收费标准￥ | 项目周期（工作日） |
细胞生长曲线 | ||
MTT或MTS | 1000/板 | 3-5 |
CCK8 | 1000/板 | 3-5 |
常规培养 | 800/株 | 7-10(因细胞而异) |
药物处理 | 1500/株(5个药物浓度) | 10-15 |
蛋白过表达 | 2500/株 | 10-15 |
蛋白敲低 | 3000/株 | 10-15 |
特殊培养条件 | 咨询定价 | — |
细胞迁移和侵袭 | ||
细胞划痕法 | 1500/细胞 | 7-10 |
迁移Transwell法 | 2500/细胞 | 7-10 |
侵袭Transwell法 | 3000/细胞 | 7-10 |
荧光定量PCR法 （检测MMP9等迁移侵袭相关基因表达） | 2500/细胞 | 10 |
克隆形成实验 | ||
常规培养 | 800/株 | 7-10(因细胞而异) |
药物处理 | 1500/株(5个药物浓度) | 10-15 |
蛋白过表达 | 2500/株 | 10-15 |
蛋白敲低 | 3000/株 | 10-15 |
特殊培养条件 | 咨询定价 | — |
细胞周期检测 | ||
流式法 | 100/样品 | 5 |
细胞凋亡检测 | ||
流式法（Annexin V+PI） | 150/样品 | 7 |
Tunel法 | 200/样品 | 10-15 |
DNA凝胶电泳 | 200/样品 | 5 |
ELISA检测核小体 | 1500/板 | 5 |
WB检测凋亡相关蛋白表达 | 800/蛋白 | 10 |
细胞模型建立 | ||
药物或化合物处理细胞模型建立 | 询价 | 15-20 |
蛋白过表达细胞模型建立 | 询价 | 15-20 |
蛋白敲低细胞模型建立 | 询价 | 1-2周 |
基因敲除细胞模型建立 | 详见Cas9系统 | — |
其它细胞模型建立 | 询价 | — |
客户提供
1. 待检测细胞系
2. 目的基因名称和信息（NCBI号）
3. 待转染质粒或菌株
4. 目的蛋白一抗
公司交付
1. 实验数据和图片（如流式结果图，WB图等）
2. 完整实验报告
