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酪胺信号放大技术(TSA)的原理及Opal多色荧光染色在形态学检测中的应用

发布时间:2017-05-25

酪酰胺信号放大技术(TSA,Tyramide signal amplification)又称为催化信号放大技术(CSA,catalyzedsignal amplification),其从产生到现在已有近二十年的发展时间,目前应用较为广泛。TSA技术是一类利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方法,其不但可以用于IF/IHC的信号放大,亦可用于Elisa、ISH等检测。可与高性能染料Alexa Fluor、传统荧光染料、酶系统和比色检测系统相兼容,本帖主要讨论一下其在IHC/IF中的应用。
原理
   TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点),产生大量的酶促产物,该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合,这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积,与随后加入的Streptavidin—HRP/荧光基团结合,经几次这样的循环放大,可以结合大量的酶分子or荧光基团,结果使其检测信号得到几何级放大。

应用
1、TSA技术可以用于检测用传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够提供极强的敏感度、检测极微量的目的抗原。
2、极大的降低抗体的用量,节约抗体,实测确实可以显著提升抗体的稀释比例。有厂家宣称在保证结果下可以降低抗体的1000倍的使用量。
3、简单的孵育步骤对样本进行处理,即可获得样本的多色标记信号,对于不同类型抗原进行检测,如核酸及蛋白的同时标记检测;同时,该技术可与其他信号放大系统或传统标记方法联合使用。
4、同一来源种属抗体的多重标记免疫组化实验,利用检测试剂的敏感性差异可以完成多重荧光标记。
缺点
1、对于非特异性信号无法去除,随信号增强而升高,实测确实如此,具有一定的非特异性扩增。
2、目前市售的试剂盒价格价格较高,除非特殊情况,一般很少研究人员愿意尝试。


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