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western blot蛋白条带风吹状或者漩涡状或者western blot少条带的原因

发布时间:2016-07-08

western blot蛋白条带风吹状或者漩涡状或者western blot少条带的原因

很多的国农在研究蛋白质的时候最常用的是免疫印迹法,也就是western blot,在做western blot的时候,有的师弟师妹常常问我怎么我的western blot蛋白少了条带,有的问为什么我的western blot蛋白就好像让风吹了一样,或者流水状、漩涡状。在这里我就给大家总结一下,出现上述情况的原因,希望给广大国农带来帮助。

1、印迹膜和凝胶没有密切的接触,在两者之间存在气泡,没有压紧或者过量的缓冲液都会出现这种情况
解决方法:

1)、使用滚筒小心驱赶印迹膜与凝胶间的气泡,或者过量的缓冲液
2)、在凝胶和印迹膜两侧使用较厚的滤纸,或者多放几层
3)、更换纤维垫,纤维垫长时间使用会变薄

2、电源条件使用不当
开始前要核实电流,在特定电压下,电流可能过高,如果缓冲液使用不当,导电率太高,引起电场强度太大,出现过热现象

3、印迹膜没有完全润湿
1)、硝酸纤维膜上的白色斑点表明其润湿不完全,使蛋白不能与其完全结合
2)、PVDF膜具有疏水的特性,放入转印缓冲液中的前,必须将膜放到甲醇中润湿

4、电泳效果差
凝胶聚合不彻底,运行时间不够,缓冲液污染、样品过载等引起电泳效果差

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