HES3.2人胚胎干细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

HES3.2人胚胎干细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

HES3.2人胚胎干细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

HES3.2人胚胎干细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

RMC KL1594 大鼠脑膜细胞,RMC细胞

F98-RFP-puro KL1595 大鼠脑胶质瘤细胞,F98-RFP-puro细胞

JRDC084 KL1596 大鼠脑胶质瘤细胞,C6细胞, C6

C6-RFP KL1597 大鼠脑胶质瘤细胞,C6-RFP细胞

C6-EGFP-puro KL1598 大鼠脑胶质瘤细胞,C6-EGFP-puro细胞

DI TNC1 KL1599 大鼠脑间质细胞,DI TNC1细胞

NUTU-19 KL1600 大鼠卵巢癌细胞株 NUTU-19细胞

MC KL1601 大鼠巨噬细胞,MC细胞

C6 KL1602 大鼠胶质瘤细胞,C6细胞

JRDC131 KL1603 大鼠回肠细胞,IEC-18细胞, IEC-18

KL1604 大鼠滑膜细胞

IR983F KL1605 大鼠骨髓瘤细胞IR983F细胞

Y3-Ag1.2.3 KL1606 大鼠骨髓瘤细胞,Y3-Ag1.2.3细胞

CASC258 KL1607 大鼠骨肉瘤细胞,UMR-106细胞, UMR-106

VMR106 KL1608 大鼠骨肉瘤 VMR106细胞

L6 KL1609 大鼠骨骼肌成肌细胞,L6细胞

JRDC087 KL1610 大鼠肝星形细胞,HSC-T6细胞, HSC-T6

CFSC-8B KL1611 大鼠肝星形细胞,CFSC-8B细胞

CFSC-3H & 5H KL1612 大鼠肝星形细胞,CFSC-3H & 5H细胞

CFSC-2G KL1613 大鼠肝星形细胞,CFSC-2G细胞

H-4-Ⅱ-E KL1614 大鼠肝细胞瘤细胞,H-4-Ⅱ-E细胞

H4-II-E-C3 KL1615 大鼠肝细胞瘤 H4-II-E-C3细胞

IAR20 KL1616 大鼠肝细胞,IAR20细胞

BRL KL1617 大鼠肝细胞,BRL细胞

BRL大鼠Buffalo KL1618 大鼠肝细胞,BRL大鼠Buffalo细胞

BRL 3A KL1619 大鼠肝细胞,BRL 3A细胞

WB-F344 KL1620 大鼠肝上皮样干细胞,WB-F344细胞

Walker-256 KL1621 大鼠肝癌细胞（乳腺癌细胞接种到*成瘤） Walker-256细胞

CBRH7919 KL1622 大鼠肝癌细胞（wistar 大鼠） CBRH7919细胞

LGZC212 KL1623 大鼠肝癌细胞,Walker-256细胞, Walker-256

RH-35 KL1624 大鼠肝癌细胞,RH-35细胞

H4-II-E-C3 KL1625 大鼠肝癌细胞,H4-II-E-C3细胞