HES3.3人胚胎干细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

HES3.3人胚胎干细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

HES3.3人胚胎干细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

HES3.3人胚胎干细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

CASC199 KL1561 袋鼠肾细胞,Pt K1 (NBL-3)细胞, Pt K1 (NBL-3)

HTB-183 KL1562 大细胞肺癌细胞,NCI-H661细胞 NCI-H661

CRL-1476 KL1563 大鼠主动脉血管平滑肌细胞,A10细胞 A10

RSMC KL1564 大鼠主动脉平滑肌细胞,RSMC细胞

SVAREC KL1565 大鼠主动脉内皮细胞,SVAREC细胞

BRL3A KL1566 大鼠正常肝细胞,BRL3A细胞

AR42J KL1567 大鼠*外分泌腺肿瘤细胞,AR42J细胞

DSL-6A/C1 KL1568 大鼠*癌细胞,DSL-6A/C1细胞

INS-1 KL1569 大鼠胰岛素细胞,INS-1细胞

USMC KL1570 大鼠血管平滑肌细胞,USMC细胞

CASC215 KL1571 大鼠雪旺细胞,RSC96细胞, RSC96

VSMC KL1572 大鼠胸主动脉平滑肌细胞，ATCC：A10 VSMC细胞

CASC022 KL1573 大鼠胸大动脉平滑肌细胞,A7r5细胞, A7r5

JRDC051 KL1574 大鼠心肌细胞,H9c2(2-1)细胞, H9c2(2-1)

IEC-6 KL1575 大鼠小肠隐窝上皮细胞,IEC-6细胞

CASC205 KL1576 大鼠嗜碱性细胞白血病细胞,RBL-2H3细胞, RBL-2H3

RBL-1 KL1577 大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞,RBL-1细胞

CRIC091 KL1578 大鼠嗜铬细胞瘤 PC-12细胞, PC-12

HBZY－1 KL1579 大鼠肾小球系膜细胞EC (HBZY－1) HBZY－1细胞

LGZC188 KL1580 大鼠肾小球系膜细胞,HBZY-1细胞, HBZY-1

NRK KL1581 大鼠肾小管上皮细胞，ATCC：CRL-6509 NRK细胞

NRK KL1582 大鼠肾细胞,NRK细胞

NRK-52E KL1583 大鼠肾细胞,NRK-52E细胞

PC-12 KL1584 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化) PC-12细胞

PC12 KL1585 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞,PC12细胞

NRK-49F KL1586 大鼠肾成纤微细胞,NRK-49F细胞

C6 KL1587 大鼠神经胶质瘤细胞,C6细胞

MADB106 KL1588 大鼠乳腺腺癌细胞系 MADB106细胞

CASC222 KL1589 大鼠乳腺癌细胞,SHZ-88细胞, SHZ-88

MADB-106 KL1590 大鼠乳腺癌细胞,MADB-106细胞

WK256 KL1591 大鼠肉瘤细胞,WK256细胞

RTE KL1592 大鼠气管上皮细胞,RTE细胞

RN-c KL1593 大鼠皮层神经元细胞,RN-c细胞