E1C4人胚胎干细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

E1C4人胚胎干细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

E1C4人胚胎干细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

E1C4人胚胎干细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

LM3 KL1463 高转移人肝癌细胞,LM3细胞

// KL1464 高转移卵巢癌细胞,HO-8910PM细胞 HO-8910PM

// KL1465 高转移肺癌细胞,95-D细胞 95-D

// KL1466 肝细胞,HL-7702细胞 HL-7702

HOC KL1467 肝卵圆细胞,HOC细胞

HHVEC KL1468 肝瘤血管内皮细胞,HHVEC 细胞

CRL-8024 KL1469 肝癌亚力山大细胞,PLC/PRF/5细胞 PLC/PRF/5

// KL1470 肝癌细胞,SMMC-7721细胞 SMMC-7721

// KL1471 肝癌细胞,RH-35细胞 RH-35

// KL1472 肝癌细胞,QGY-7703细胞 QGY-7703

// KL1473 肝癌细胞,QGY-7701细胞 QGY-7701

CRL-1830 KL1474 肝癌细胞,Hepa 1-6细胞 Hepa 1-6

HB-8065 KL1475 肝癌细胞,Hep G2细胞 Hep G2

HB-8064 KL1476 肝癌细胞,Hep 3B2.1-7细胞 Hep 3B2.1-7

// KL1477 肝癌细胞,HCCLM3细胞 HCCLM3

// KL1478 肝癌细胞,CBRH-7919细胞 CBRH-7919

// KL1479 肝癌细胞,BEL-7405细胞 BEL-7405

// KL1480 肝癌细胞,BEL-7404细胞 BEL-7404

// KL1481 肝癌细胞,BEL-7402细胞 BEL-7402

TC-jcyj0067 KL1482 干酪乳杆菌干酪亚种

KL1483 干酷乳杆菌 ACCC 10639

// KL1484 腹水瘤细胞,SAC-IIC3细胞 SAC-IIC3

// KL1485 腹水瘤细胞,SAC-IIB2细胞 SAC-IIB2

CCL-8 KL1486 腹水瘤细胞,S-180细胞 S-180

TC-jcyj0043 KL1487 副溶血性弧菌

CASC178 KL1488 负鼠肾细胞,OK细胞, OK

OK KL1489 负鼠肾细胞,

CRL-1840 KL1490 负鼠(opossum)肾细胞

KL1491 腐败希瓦氏菌 NCIMB12202

KL1492 福氏志贺氏菌 CMCC 51572

KL1493 浮游球衣菌 NBRC13543

KL1494 弗氏柠檬酸杆菌 CICC 20211

KL1495 弗氏链霉菌 ACCC 40012