LT04小鼠胚胎干细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

LT04小鼠胚胎干细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

LT04小鼠胚胎干细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

LT04小鼠胚胎干细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

菌株 KL1428 和元菌种与细胞

KL1429 汉逊德巴利酵母 ACCC 20010

KL1430 海枣曲霉 ACCC 30164

KL1431 哈茨木霉 ACCC 30371

Hed68 KL1432 果子狸肾上皮细胞,Hed68细胞

RTG KL1433 鲑鱼胚胎细胞,RTG细胞

CHSE KL1434 鲑鱼胚胎细胞,CHSE细胞

TC-jcyj0129 KL1435 光滑念珠菌

TC-jcyj0096 KL1436 光孢短柄帚霉

JRDC038 KL1437 骨髓瘤细胞株 U266细胞, U266

// KL1438 骨髓瘤细胞,SP2/0细胞 SP2/0

TIB-9 KL1439 骨髓瘤细胞,P3X63Ag8细胞 P3X63Ag8

CRL-1580 KL1440 骨髓瘤细胞,P3X63Ag8.653细胞 P3X63Ag8.653

TIB-18 KL1441 骨髓瘤细胞,P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]细胞 P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]

CRL-1646 KL1442 骨髓瘤细胞,FO细胞 FO

HTB-96 KL1443 骨肉瘤细胞,U-2 OS细胞 U-2 OS

HTB-94 KL1444 骨肉瘤细胞,SW1353细胞 SW1353

CRL-1427 KL1445 骨肉瘤细胞,MG-63细胞 MG-63

KL1446 谷氨酸棒杆菌 ACCC 16522

TC-jcyj0047 KL1447 构巢曲霉 ATCC 24919

MDCK superdome KL1448 狗肾细胞隆突型 MDCK superdome细胞

Super Tube KL1449 狗肾细胞,Super Tube细胞

LGZC194 KL1450 狗肾细胞,MDCK细胞, MDCK

MDCK(NBL-2) KL1451 狗肾细胞,MDCK(NBL-2)细胞

CCL-34 KL1452 狗肾细胞,MDCK (NBL-2)细胞 MDCK (NBL-2)

MDCK-EGFP-puro KL1453 狗肾上皮细胞,MDCK-EGFP-puro细胞

CASC073 KL1454 狗肾恶性组织细胞增生症细胞,DH82细胞, DH82

KL1455 狗垂体细胞

// KL1456 宫颈癌细胞,HeLa细胞 HeLa

CCL-2.1 KL1457 宫颈癌细胞,HeLa 229)细胞 HeLa 229)

HCE1 KL1458 宫颈癌细胞,HCE1细胞

KL1459 根土壤杆菌（发根植物单胞菌） ATCC11325

KL1460 睾丸酮丛毛单胞菌 NBRC14951

CRL-2065 KL1461 睾丸间质细胞瘤细胞,MLTC-1细胞 MLTC-1

JRDC124 KL1462 高转移人肝癌细胞,MHCC97-H细胞, MHCC97-H