WCH-17土拨鼠肝细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

WCH-17土拨鼠肝细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

WCH-17土拨鼠肝细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

WCH-17土拨鼠肝细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

KLC3361 人结肠癌细胞 SW620-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3362 人原位*腺癌细胞 BxPc-3-EGFP-puro （慢病毒构建稳定株)

KLC3363 仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1-EGFP（CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)

KLC3364 人肺癌细胞 PC9-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3365 S8-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3366 猪肾上皮细胞 PK15-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3367 狗肾上皮细胞 MDCK-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3368 猴胚胎肾上皮细胞 marc-145-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3369 人乳腺癌细胞 MCF-7-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3370 大鼠脑胶质瘤细胞 C6-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3371 大鼠脑胶质瘤细胞 F98-RFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3372 人宫颈癌细胞 Hela-RFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3373 大鼠乳腺癌细胞 MADB-106-RFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3374 人肺癌细胞 A549-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3375 人肝癌细胞 97H-CMV-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3376 人肝癌细胞 97H-EGFP-puro（慢病毒构建稳定株)

KLC3377 人胚肾细胞 293XL-hTLR7

KLC3378 人胚肾细胞 293XL-hTLR9

KLC3379 人肾癌细胞 A498-EGFP-puro

KLC3380 小鼠成纤维细胞 L929-EGFP-puro

KLC3381 人胃癌细胞 BGC-823-EGFP-puro

KLC3382 小鼠肝癌细胞 Hepa1-6-EGFP（CMV-GFP慢病毒构建稳定株）

KLC3383 小鼠骨髓基质细胞 P9-EGFP-puro

KLC3384 小鼠Lewis肺癌细胞 LLC-RFP-puro

KLC3385 人胚肺成纤维细胞 MRC-5-EGFP+puro

KLC3386 人骨肉瘤细胞 U-2 OS-EGFP+puro

KLC3387 人肝癌细胞（高转移） MHCC-97H

KLC3388 人肝癌细胞（低转移） MHCC-97L

KLC3389 微血管内皮细胞 CMVECs

KLC3390 多巴胺能神经元细胞系 MES23.5

KLC3391 人骨肉瘤细胞 HOS

KLC3392 小鼠肺上皮细胞株 MLE-12

KLC3393 非洲绿猴胚胎肾上皮细胞 MA104

KLC3394 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H226

KLC3395 小鼠结肠癌细胞 MCA38