CHO/dhFr-中国仓鼠卵巢细胞－二氢叶酸还原酶缺陷型完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

CHO/dhFr-中国仓鼠卵巢细胞－二氢叶酸还原酶缺陷型冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

CHO/dhFr-中国仓鼠卵巢细胞－二氢叶酸还原酶缺陷型复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

CHO/dhFr-中国仓鼠卵巢细胞－二氢叶酸还原酶缺陷型复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

KLC3329 大鼠脑胶质瘤细胞 F98

KLC3330 小鼠骨髓基质细胞 P9

KLC3331 小鼠骨髓基质细胞 R9[P9R]

KLC3332 BN

KLC3333 小鼠B淋巴细胞 WEHI-231

KLC3334 143B

KLC3335 人肾癌细胞 A498

KLC3336 人肝癌细胞 97H

KLC3337 人子宫内膜癌细胞 Ishikawa

KLC3338 人胆管癌细胞 QBC939

KLC3339 小鼠脑微血管内皮细胞 Bend3

KLC3340 口腔鳞状细胞癌细胞 HN13

KLC3341 人*癌细胞 MiaCaPa-2

KLC3342 小鼠黑色素瘤细胞 B16-F0-EGFP （稳定株）

KLC3343 人膀胱癌细胞 T24-EGFP（CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)

KLC3344 人宫颈癌细胞 Hela-Luc （稳定株）

KLC3345 人单核细胞 THP1-Blue （稳定株）

KLC3346 人单核细胞 THP1-Blue-CD14（稳定株）

KLC3347 大鼠脑胶质瘤细胞 C6-RFP（慢病毒构建稳定株）

KLC3348 人结肠腺癌细胞 SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4]（慢病毒构建稳定株)

KLC3349 人骨髓瘤细胞 OPM-2-UBC-EGFP（稳定株）

KLC3350 人骨髓瘤细胞 NCI-H929-UBC-EGFP（稳定株）

KLC3351 人骨髓瘤细胞 OPM-2-CMV-EGFP（稳定株）

KLC3352 人骨髓瘤细胞 NCI-H929-CMV-EGFP（稳定株）

KLC3353 小鼠软骨细胞 ATDC-5-EGFP[ATDC-5-pGC-FU-GFP]（稳定株）

KLC3354 人脑神经胶质瘤细胞 U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7]（慢病毒构建稳定株)

KLC3355 人舌鳞癌细胞 Tca-8113-EGFP(CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)

KLC3356 人舌鳞癌细胞 CAL 27-EGFP(CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)

KLC3357 人脑神经胶质瘤细胞 U-373MG-EGFP（Ubc-EGFP慢病毒构建稳定株)

KLC3358 人脑星形胶质母细胞瘤 U-87MG-EGFP（Ubc-EGFP慢病毒构建稳定株)

KLC3359 人食管癌细胞 Eca-109-GFP-puro(pLVT7慢病毒构建稳定株)

KLC3360 人舌鳞癌细胞 CAL 27-EGFP-puro(pLVT7慢病毒构建稳定株)