C57/B6-S小鼠皮肤成纤维样细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

C57/B6-S小鼠皮肤成纤维样细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

C57/B6-S小鼠皮肤成纤维样细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

C57/B6-S小鼠皮肤成纤维样细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

KL Cell Culture Reagents

KL0010 FBS 胎牛血清 Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested 10 ml

KL0025 FBS 胎牛血清 Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested 25 ml

KL0103 T/E 胰酶/EDTA消化液 Trypsin/EDTA solution 100 ml

KL0113 TNS 胰酶中和液 Trypsin Neutralization Solution 100 ml

KL0113-sf TNS-sf 胰酶中和液-无血清 TNS-sf (Trypsin Neutralization Solution-serum free) 100 ml

KL0123 ECDS 非酶细胞裂解液 Enzyme-Free Cell Dissociation Solution 100 ml

KL0133 CFM 细胞冻存液 Cell Freezing Medium 50 ml

KL0143 SF-CFM 无血清细胞冻存液   Serum-Free Cell Freezing Medium 50 ml

KL0153 StemCryo 人胚胎干细胞冻存液 Human Pluripotent Stem Cell Cryopreservation Medium 50ml

KL0163 StemCryo 人胚胎干细胞冻存液 Human Pluripotent Stem Cell Cryopreservation Medium, 5 x 10mL 

KL0203 TB 台盼蓝 Trypan Blue, 0.4% 50 ml

KL0303 DPBS 磷酸盐缓冲液 Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline 500 ml

KL0313 HBSS 平衡盐溶液 Hank's Balanced Salt Solution 500 ml

KL0403 PLL 多聚赖氨酸 Poly-L-Lysine 1 mg/ml 1 ml

KL0413 PLL 多聚赖氨酸 Poly-L-Lysine 10 mg/ml 1 ml

KL0423 GSN 0.2％的明胶溶液 0.2% Gelatin Solution 100ml

KL0500 FBS 胎牛血清 Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested 500 ml

KL0503 P/S 青霉素/链霉素溶液 Penicillin/Streptomycin Solution 5 ml

KL0513 P/S 青霉素/链霉素溶液 Penicillin/Streptomycin Solution 100 ml

KL0523 AMS 抗真菌溶液 Antimycotic Solution 50 ml

KL0533 ABAMS 抗菌/抗霉菌溶液 Antibiotic/Antimycotic Solution 50 ml

KL0600 CCGW 细胞培养超纯水 Cell Culture Grade Water 500 ml

KL0603 MDS   肌细胞分离液 Myocyte Detachment Solution 100 ml