幼兔肺成纤维样细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

幼兔肺成纤维样细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

幼兔肺成纤维样细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

幼兔肺成纤维样细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

KL2262 MelGS-2 黑色素细胞生长因子（不含TPA) TPA-free Melanocyte Growth Supplement 5 ml

KL2352 FGS 成纤维细胞生长因子 Fibroblast Growth Supplement 5 ml

KL2362 FGS-sf 成纤维细胞生长因子-sf Fibroblast Growth Supplement-sf 5 ml

KL2372 FGS-acf 成纤维细胞生长因子（不含动物成分） Fibroblast Growth Supplement-animal component free 5 ml

KL2382 FGS-2 成纤维细胞生长因子-2 Fibroblast Growth Supplement-2 5 ml

KL2572 TEpiCGS 扁桃体上皮细胞生长因子 Tonsil Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL2652 OKGS 口腔角质细胞生长因子 Oral Keratinocyte Growth Supplement 5 ml

KL2952 CoEpiCGSS 结肠上皮细胞生长因子 Colonic Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL3262 BEpiCGS 支气管上皮细胞生长因子 Bronchial Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL3272 SAEpiCGS 小气道上皮细胞生长因子 Small Airway Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL3552 SkMCGS 骨骼肌细胞生长因子 Skeletal Muscle Cell Growth Supplement 5 ml

KL4152 EpiCGS 上皮细胞生长因子 Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL4162 EpiCGS-2 上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-2 5 ml

KL4182 EpiCGS-a 动物上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-animal 5 ml

KL4252 MCGS 肾系膜细胞生长因子 Mesangial Cell Growth Supplement 5 ml

KL4352 UCGS 尿道上皮细胞生长因子 Urothelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL4452 PEpiCGS 前列腺上皮细胞生长因子 Prostate Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml

KL4652 ObGS 成骨细胞生长因子 Osteoblast Growth Supplement 5 ml

KL4682 CGS 软骨细胞生长因子 Chondrocyte Growth Supplement 5 ml

KL4752 SGS 滑膜细胞生长因子 Synoviocyte Growth Supplement 5 ml

KL4852 NPCGS 髓核细胞生长因子 Nucleus Pulposus Cell Growth Supplement 5 ml