8E5外周血淋巴细胞完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。

培养条件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

细胞生长：贴壁生长

细胞形态：上皮样；多角形

细胞传代：1:2-1:4传代；每周2-3次

8E5外周血淋巴细胞冻存步骤：我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):

⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次

⑵ 胰酶消化

⑶ 加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止

⑷ 离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收集就用第四部）

⑸ 吸出离心管上清液，加1ML 的冻存液重悬细胞，移到冻存管，放4度半小时，-20 度两小时，-70度过夜，再放液氮长期保存。

8E5外周血淋巴细胞复苏操作步骤如下：

1 将培养基置于37℃回温，回温后将其用75%酒精擦拭，移入无菌操作台内；

2 戴上护目镜，厚毛线手套之后，从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，放入37-40℃水浴中，并不时摇动，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，转移到已加入10ml培养液的离心管内；

3 在1,000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2温箱静置培养；

4 次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代；否则，及时更换培养基继续培养。

8E5外周血淋巴细胞复苏注意事项如下：

A.复苏细胞请一定要注意安全，尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入，请一定要拧松冻存管，排出液氮，防止温度升高时爆炸。

B. 细胞复苏时需使用指定培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类，若因实验需要，必须有所不同，须以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行实验。

C. 细胞复苏时可以暂时不使用抗生素（G418等），以利于细胞的恢复。

D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。

KL2211 MelM-2 黑色素细胞培养基-2 Melanocyte Medium-2 500 ml

KL2301 FM 成纤维细胞培养基 Fibroblast Medium 500 ml

KL2331 FM-2 成纤维细胞培养基-2 Fibroblast Medium-2 500 ml

KL3201 AEpiCM 肺泡上皮细胞培养基 Alveolar Epithelial Cell Medium 500 ml

KL3501 SkMCM 骨骼肌细胞培养基 Skeletal Muscle Cell Medium 500 ml

KL4101 EpiCM 上皮细胞培养基 Epithelial Cell Medium 500 ml

KL4131 EpiCM-a 动物上皮细胞培养基 Epithelial Cell Medium-animal 500 ml

KL4201 MCM 肾系膜细胞培养基 Mesangial Cell Medium 500 ml

KL4601 ObM 成骨细胞培养基 Osteoblast Medium 500 ml

KL4651 CM 软骨细胞培养基 Chondrocyte Medium 500 ml

KL4701 SM 滑膜细胞培养基 Synoviocyte Medium 500 ml

KL4801 NPCM 髓核细胞培养基 Nucleus Pulposus Cell Medium 500 ml

KL5201 HM 肝细胞培养基 Hepatocyte Medium 500 ml

KL5301 SteCM 星形细胞培养基 Stellate Cell Medium 500 ml

KL6201 CMM 心肌细胞培养基 Cardiac Myocyte Medium 500 ml

KL6591 TMCM 小梁网细胞培养基 "Trabecular Meshwork Cell Medium

" 500 ml

KL7121 TM 滋养层细胞培养基 Trophoblast Medium 500 ml

KL7201 AdM 脂肪细胞培养基 Adipocyte Medium 500ml

KL7211 PAM 前脂肪细胞培养基 Preadipocyte Medium 500 ml

KL7221 PADM 脂肪细胞诱导分化培养基 Preadipocyte Differentiation Medium 500 ml

KL7501 MSCM 间充质干细胞培养基 Mesenchymal Stem Cell Medium 500 ml

KL7531-500 MODM-500 间充质干细胞-成骨细胞分化培养基 Mesenchymal Stem Cell Oseogenic Differentiation Medium 500 ml

KL7531-250 MODM-250 Mesenchymal Stem Cell Oseogenic Differentiation Medium 250 ml