人正常结肠上皮细胞 (NCM460) 

二、细胞培养操作

1)复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考 ,具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻 ,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在              1000RPM 条件下离心 4 分钟 ,弃去上清液 ,补 加 1-2m L 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培 养瓶中培 养过夜  (或将 细胞悬液加入 10cm 皿中 ,加入约 8ml 培养基 ,培养过夜)  。第二天换液并 检 查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90% ,即可进行传代培养。

a、弃去培养上清 ,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

b、加 1ml 消化液  ( 0.25%Trypsin-0.53m M EDTA)  于培养瓶中 ,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟, 然后在显微镜下观察细胞消化情况 ,若细胞大部分 变圆并脱落 ,迅速拿回操作台 ,轻敲几下培养 瓶后加 少量培养基终止消化。

c、按 6-8ml/瓶补加培养基 ,轻轻打匀后吸出 ,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟 ,弃去上清液 ,补加 1 -2m L 培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按 1:  2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。  

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时 ,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液 ,装入无菌离心管中 ,  1000 rpm条件下离心4 min ,弃去上清液 ,用PBS清洗 一遍 ,弃尽PBS ,进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液 ,使细胞密度5× 10⁶~ 1 × 10⁷/mL ,轻轻混匀 ,每支冻存管冻存 1mL细胞悬液 ,注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱 ,  24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、培养注意事项  

1 . 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好 ,培养液是否有漏液 、浑浊等现象 ,若有上述现象 发生请 及时和我们联系。 

2 . 仔细阅读细胞说明书 ,了解细胞相关信息 ,  如细胞形态 、  所用培养基 、  血清比例、  所需 细胞因    子等 ,确保细胞培养条件一致 ,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题 ,责任由 客户自行承担。 

3 . 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面 ,  显微镜下观察细胞状态。  因运输问题 ,  部分细胞由于温度 变化及 剧烈碰撞死亡破碎形成碎片 ,是正常现象。观察好细胞状态后 ,  75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于  37℃培养箱放置 2-4 h。 

4 . 贴壁细胞可以消化 ,悬浮细胞直接混匀收集细胞 ,  900 rpm- 1000 rpm 离心 3 min ,弃上 清。加

5 mL PBS 重悬细胞 ,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min ,用新鲜的完全培养基重悬 细胞 ,并接种 到新的培养瓶或培养皿中 ,置于培养箱中进行培养。 

5 . 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 

6 . 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片 ,记录细胞状态 ,便于和我司技术部沟通 交流。  由 于运输的原因 ,个别敏感细胞会出现不稳定的情况 ,请及时和我们联系 ,  告知细胞 的具体情况 ,  以 便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 

7. 该细胞仅供科研使用。 

8. 备注: 运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞 ,请换用按照说明书细胞培 养条件新配 制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代 。 

9. 注意:1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。